Mutacje genu P w oculocutaneous albinism, bielactwo oczu i zespół Prader-Willi Plus bielactwo cd

Pięć eksonów tworzących gen genu tyrozynazy i 24 kodujących egzonów ludzkiego genu P. i sąsiednie niekodujące sekwencje (niepublikowane dane) amplifikowano z genomowego DNA przez reakcję łańcuchową polimerazy (PCR) 10. Amplifikowane segmenty następnie przeszukiwano pod kątem mutacji przez równoczesną analizę jednoniciowych polimorfizmów konformacyjnych (SSCP) i heterodupleksów11. Fragmenty egzonu, które dawały nienormalne wzory, były niezależnie ponownie amplifikowane z genomowego DNA w dwóch powtórzeniach i klonowane w M13mp18, a sekwencje DNA co najmniej sześciu niezależnych klonów określono12. Segregacja genetyczna i analizy sprzężeń
Wybrane segmenty egzonu z genu P amplifikowano przez PCR z genomowego DNA pacjentów, dostępnych krewnych i niespokrewnionych normalnych kontroli. Występowanie specyficznych zmutowanych alleli u tych osobników było testowane przez SSCP i analizy heterodupleksu lub przez trawienie produktów PCR odpowiednimi enzymami restrykcyjnymi i elektroforezą w 8% żelach poliakryloamidowych (lub w obu przypadkach obydwoma sposobami). W przypadku rodziny Pacjenta 1, analiza lod-score została przeprowadzona z wersją Liped z 1987 roku13.
Wyniki
Figura 3. Figura 3. Sekwencje DNA w regionie mutacji z przesunięciem ramki w kodonie 654 genu P u pacjenta 1. Pokazana jest sekwencja nici kodującej. Wskazano delecję przesunięcia ramki o jedną zasadę w kodonie 654. Pokazano sekwencje Exon 20 i końcową część dziewiętnastej sekwencji pośredniej (IVS19).
Przeszukiwanie Heteroduplex i SSCP genu tyrozynazy u Pacjenta 1, który był produktem inbredu i miało klinicznie ciężką białaczkę albiniczną typu II, nie wykazało żadnych nieprawidłowości. Jednak badanie przesiewowe jej genu P wykazało pozornie homozygotyczny nieprawidłowy wzorzec eksonu 20. Z wyjątkiem serii powszechnych, niepatologicznych polimorfizmów sekwencji DNA, które obserwowaliśmy również wśród wielu normalnych osób, pozostałe 23 egzony genu P wydawały się być normalna. Egzon 20 był zatem niezależnie ponownie amplifikowany i klonowany w M13mp18, a analiza sekwencji DNA ośmiu klonów wykazała, że wszystkie miały delecję pojedynczej zasady w kodonie 654 (Figura 3). Ta delecja powoduje przesunięcie ramki, z wynikającym z tego obcięciem dystalnego polipeptydu P nonsensownego w kodonie 662.
Delecja sekwencji przesunięcia w kodonie 654 tworzy nowe miejsce cięcia dla Hinfl (GANTC), pozwalając nam zarówno potwierdzić mutację u Pacjenta i przeanalizować segregację tego zmutowanego allelu w jej rodzinie. Przebadaliśmy w sumie 7 nietkniętych członków i dotkniętego członka jej rodziny (Figura 2) i 14 niespokrewnionych indokapi-kańskich kontrolnych zarówno przez cięcie HinfI, jak i SSCP i analizy heterodupleksu ich produktów PCR egzonlu. Pacjent i jej podobnie potraktowany podwójny pierwszy kuzyn byli zarówno homozygotyczni pod względem przesunięcia ramki w kodonie 654, a pewna liczba niedotkniętych krewnych była heterozygotyczna (Figura 2). Przeciwnie, ta mutacja była nieobecna we wszystkich niespokrewnionych kontrolach. Wyniki dwupunktowej analizy sprzężeń genetycznych były zgodne z powiązaniem między przesunięciem ramki a albinizmem alopatycznym typu II w tej rodzinie (punktacja lodowa 2,70 przy frakcji rekombinacji wynoszącej 0).
Rysunek 4
[podobne: nietolerancje pokarmowe testy, wrzecionko nerwowo mięśniowe, konie zimnokrwiste allegro ]

Ten wpis został opublikowany w kategorii Bez kategorii i oznaczony tagami , , . Dodaj zakładkę do bezpośredniego odnośnika.

0 odpowiedzi na „Mutacje genu P w oculocutaneous albinism, bielactwo oczu i zespół Prader-Willi Plus bielactwo cd

  1. Glyph pisze:

    Samemu się jest tępotą i innych pouczać

  2. Aniela pisze:

    [..] odnosnik do informacji w naukowej publikacji odnosnie: klinika stomatologiczna kraków[…]

  3. Jigsaw pisze:

    moje wyniki: tsh 4,400

  4. Konstanty pisze:

    [..] Cytowany fragment: wrocław catering dietetyczny[…]

  5. Jacek pisze:

    bóle podbrzusza i z boku koło biodra to glisda